ELISA

    *ANTÍGENO (Ag): Molécula exógena, que se encuentra en la superficie de un 

     agente patógeno y que al entrar en contacto con el organismo, induce la

     producción de una respuesta del Sistema Inmune específica

(    formación de Acs)

    *ANTICUERPO (Ac):Proteína producida como respuesta a una sustancia

     “extraña” (Ag) y que tiene la capacidad de combinarse con él (complejo Ag-Ac).

     INTRODUCCION: El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs marcados

    con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto 

    inmunológica como enzimática. 

    Al   estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado con una enzima e

    insolubilizado sobre un soporte o pocillo (inmunoadsorbente) la reacción Ag-Ac

    quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición

de un substrato especifico que al actuar, la enzima producirá un color

    observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un 

    espectrofotómetro o un colorímetro.

  

    TIPOS:

    ELISA no competitivo:Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está

en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo Ag-Ac, y al

    agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color.

    *Directo:Detectan Ag

    *Indirecto:  Detectan Ac 

    *ELISA Sandwich 

    *Doble (DAS)

    *Heterólogo (HADAS)

    ELISA competitivo:El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un

    número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una

    muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el

    conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra. 

    Pasos generales

    *Tapizado del pocillo con el Ag o Ac.

    *Adición de la muestra problema con la mezcla de Ags o Acs.

    *Unión del Ag o Ac específico al Ag o Ac tapizado en el pocillo.

    *Lavado del pocillo para eliminar el exceso de Ag o Ac no unido.

     

    *Adición del Ac secundario marcado con la enzima.

   

    *Unión del Ac secundario al Ag o Ac.

    *Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida.

    *Adición del sustrato.

    *Unión del sustrato a la enzima.

    *Coloración.

    ELISA directo

  

     Consta de las siguientes etapas:

     1.Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos.

  

  2.Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados. 

    3.Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.

     4.Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan reaccionado. 

         

    5.Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 

    6.Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

     ELISA indirecto

    Consta de las siguientes etapas:

     1.Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos. 

  2.Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados.

     3.Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.

     4.Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado. 

     5.Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.

     6.Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.